豬流行性腹瀉抗體檢測(cè)試劑盒

1 抗原預(yù)包被板條 1/2塊 7 陰性對(duì)照 0.8/1.6ml

2 酶結(jié)合物 11/22ml 8 陽性對(duì)照 0.8/1.6ml

3 10倍濃縮洗滌液 50/100ml 9 血清稀釋板 1/2塊

4 顯色液 11/22ml 10 封板膜 2/4張

5 樣本稀釋液 50/100ml 11 說明書 1份

6 終止液 11ml      

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea, PED）病毒抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)豬血清中的豬流行性腹瀉病毒抗體

需自備的設(shè)備及試劑

1.    微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2.    一次性移液器吸頭。

3.    量筒：500ml。

4.    96孔板酶標(biāo)儀。

5.    蒸餾水或去離子水。

6.    洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：99的體積比稀釋待檢血清（例如：495μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清）。

注意：陰性和陽性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。

注意事項(xiàng)

1.    試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

2.    不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3.    底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4.    TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5.    檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6.    所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7.    嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

8.         血清稀釋板為一次性用品，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的*容量為300μl/孔。

操作步驟

1.    取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照1孔、陽性及對(duì)照2孔，取陰性及陽性對(duì)照各100μl

分別加入反應(yīng)孔中。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

2.    蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置37℃溫育30分鐘。

3.    小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，*在干凈吸水紙上拍干。

4.    每孔加酶結(jié)合物50μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

5.    小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同3。切記*在干凈吸水紙上拍干。

6.    每孔加顯色液100μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

7.    每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是：

陰性對(duì)照（N）OD值<0.15，同時(shí)陽性對(duì)照（P）OD值>0.4。

計(jì)算方法：

樣品OD值÷陽性對(duì)照OD均值=S/P值

陰陽性判斷：

S/P值≥0.35判斷為陽性；

S/P值<0.35判斷為陰性。